Après avoir remis la Lune à sa place, Gru a abandonné sa profession de super-méchant pour se consacrer à sa vie de père de famille. Un jour, un criminel non-identifié vole, à l'aide d'un aimant géant, un laboratoire militaire consacré à la fabrication d'une arme secrète, le sérum de transmutation PX-41, ayant pour effet de transformer son hôte en un mutant violet enragé et indestructible. Plus tard, Gru se fait enlever par Lucy Wilde, un agent de l'AVL (Agence Vigilance de Lynx),ayant détecté des traces du sérum dans un centre commercial. Fort de son expérience de super-criminel, il se voit confier la mission d'infiltrer ce centre sous couvert d'un commerce de pâtisserie pour tenter de le retrouver. Dans un premier temps, il refuse pour se consacrer à sa nouvelle activité : l'élaboration d'une gamme de confitures et de gelées, mais à la suite de l'échec cuisant de la première tentative, le professeur Néfario part pour recommencer une carrière maléfique. Gru accepte la mission, et se fait rejoindre à son grand mécontentement par Lucy, seule volontaire à vouloir lui porter assistance.
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